食品（奶粉）中三聚氰胺检测方法

食品（奶粉）中三聚氰胺检测方法包

固相萃取（SPE）方法

含量测定 LC-UV 方法•

含量测定 LC-MS 参考方法

三聚氰胺分析方法包组件清单

包括：

1 Venusil ASB-C18 或 ASB-C8 色谱柱或 XBP-C8 色谱柱（4.6*250mm,5μm,150Å）任选 1 支

2 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50 支/盒，3 盒

3 真空固相萃取装置（12 位）

4 0.22μm，13mm Nylon 针式过滤器过滤 200 个/包

5 三聚氰胺标准品 1 瓶（250mg，≥99.5%）

6 三聚氰胺分析方法手册 1 份

7 庚烷磺酸钠（10g/瓶），高纯甲醇、乙睛

* 试剂规格请以签订合同时为准，艾德豪克公司拥有最终解释权。

三聚氰胺理化性质

三聚氰胺：英文名“melamine”，简称三胺， 学名三氨三嗪， 别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。

分 子 式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 ；分 子 量：126.12

物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；

相对密度：1570kg/m³ ；

熔点：在常压下，354℃分解；升华温度：300℃；

溶 解 性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性

化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种

酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟

基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反

应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用

途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防

火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。

固相萃取(SPE)方法

1 固相萃取(SPE)柱的选择：

三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点：

1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定 pH 值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样

品更干净，提高检测的灵敏度。

2) 批次重复性好。

3) 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。

2.1 标准样品配制：

取 50mg三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50mL得到 1000ppm的标

准溶液，使用时，以提取液(1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。

2.2 提取：

称取饲料/奶粉样品 5g (或牛奶 10mL)，加入 50mL 1%三氯乙酸提取液，充

分混匀，加入 2mL 2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取部分溶液转移至 10mL

离心管中，8000rpm/min离心 10min，取上清液 3mL过混合型阳离子交换小柱

(PCX)，同时处理多个样品，需要用真空固相萃取装置（12 位），可达到方便、

快速、高通量分析样品的目的。

2.3 净化(PCX小柱，60mg/3mL) ：

1) 活化及平衡：3mL 甲醇，3mL 水

2) 上样：加入提取液 3mL

3) 淋洗：3mL 水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。

4) 洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL 氨水+95mL

甲醇)。

5) 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2mL。

2.4 检测：

用 HPLC-UV 中国农业部颁标准检测方法分析，测得 PCX 柱的回收率结果

如下：

添加水平（mg/L） 回收率

空白

0.01 116%

0.1 108%

0.5 92%

2 96%

由上表可以看出：用 PCX 柱净化样品，可以得到满意的回收率。

HPLC-UV 检测方法

三聚氰胺在传统的 C18 柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有

良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局（FDA）的三聚氰胺检测方法

和中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法，采用 Venusil ASB 系列和Venusil XBP 色谱柱，

均能得到良好的结果，分析色谱图如下：

1、 三聚氰胺的 FDA 检测方法

色谱柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm

缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0。

流动相：缓冲液：乙腈=85：15

进样量：样品用缓冲液溶解成约 0.1mg/mL，进 10μL，

进样前用0.22μm针式过滤器过滤

流 速：1.0mL/min

柱 温：40 ℃

波 长：240nm

2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法

（1）色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm

缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠

流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15

进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10uL

进样前用0.22μm针式过滤器过滤

流 速：1.0mL/min

柱 温：40℃

波 长：240nm

（2）色谱柱：Venusil XBP-C8 4.6×250mm

缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠

流动相：缓冲液：乙腈=85：15

进样量：样品用缓冲溶液溶解成约 0.1mg/ml，进 10μL

进样前用0.22μm针式过滤器过滤

流 速：1.0mL/min

柱 温：20℃

波 长：240nm

LC-MS 参考方法

由于 HPLC-UV 方法中，流动相添加了离子对试剂，限制了液质联用方法的

使用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的 C18 柱上保留很差，没

有良好的保留与分离。

源于此问题，艾德豪克公司提供Venusil ASB 系列亲水色谱柱，不用离子对试剂

也能得到有效的保留与分离，参考方法如下：

缓冲液：10mM NH4AC

流动相：缓冲液：ACN=95：5

流 速：1.0mL/min

进样量：先用 70%ACN 溶解成约 1mg/mL，用 ACN 稀释成 0.1mg/mL，进 10μL

进样前用0.22μm针式过滤器过滤

柱 温：40℃

波 长：240nm

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